注射用重組人干擾素α2a是由高效表達(dá)人干擾素α2a基因的大腸桿菌，經(jīng)發(fā)酵、分離和高度純化后獲得的凍干制劑，含適宜穩(wěn)定劑，不含防腐劑和抗生素[1]，主要用于治療病毒性疾病及腫瘤。水分含量是注射用重組人干擾素α2a的一項(xiàng)重要指標(biāo)，影響藥品的外觀、性狀、含量、穩(wěn)定性等。水分含量越低，藥品越能長(zhǎng)期穩(wěn)定的儲(chǔ)存。

本文參照《中國(guó)藥典》2015年版通則0832水分測(cè)定法中容量滴定法，利用水分測(cè)定儀-卡氏干燥爐聯(lián)用技術(shù)測(cè)定注射用重組人干擾素α2a中水分含量，其原理為樣品在干燥爐內(nèi)加熱，使其水分在高溫下蒸發(fā)釋放，蒸發(fā)出來(lái)的水分由干燥載氣（空氣或氮?dú)猓┩扑腿胨譁y(cè)定儀進(jìn)行測(cè)定[2]。聯(lián)用干燥爐可自動(dòng)完成測(cè)定，提高工作效率；密封蓋能夠保證樣品在測(cè)定過(guò)程中不受環(huán)境的影響，同時(shí)避免了樣品在滴定杯中的相互干擾，使滴定杯始終保持良好的狀態(tài)，測(cè)定結(jié)果重復(fù)性好，準(zhǔn)確度高。

1實(shí)驗(yàn)部分

1.1主要儀器

V30水分測(cè)定儀（METTLER TOLEDO）、Stromboli加熱爐樣品轉(zhuǎn)換器（METTLER TOLEDO）、超微量電子天平（芬蘭kibron）。

1.2試劑

無(wú)水甲醇（國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）、1 mg/mL費(fèi)休氏試液（Merck）、2 mg/mL費(fèi)休氏試液（Merck）、5 mg/mL費(fèi)休氏試液（Merck）、固體標(biāo)準(zhǔn)水（Merck）。

1.3實(shí)驗(yàn)樣品

注射用重組人干擾素α2a（長(zhǎng)春生物制品研究所有限責(zé)任公司）。

1.4測(cè)定步驟

1.4.1操作條件

加熱爐樣品轉(zhuǎn)換器加熱溫度：（150±2）℃；加熱爐樣品轉(zhuǎn)換器加熱時(shí)間：10 min；費(fèi)休氏試液滴定度：1 mg/mL、2 mg/mL、5 mg/mL。

1.4.2樣品測(cè)定

啟動(dòng)儀器，加入適量無(wú)水甲醇，待儀器平衡后，用10μL微量進(jìn)樣器量取經(jīng)稱量的10μL純化水（精確至0.01 mg）加入到滴定杯中，儀器顯示質(zhì)量后按“確定”鍵，儀器開始自動(dòng)滴定，到達(dá)終點(diǎn)時(shí)，屏幕顯示費(fèi)休氏試液的滴定度。按此法標(biāo)定三次，取三次標(biāo)定的平均值，即為本次費(fèi)休氏試液的滴定度。

將注射用重組人干擾素α2a搗碎，稱取樣品適量（精確至0.01 mg），記錄樣品質(zhì)量，將樣品密封后置于卡氏干燥爐上。在水分測(cè)定儀輸入樣品質(zhì)量，用費(fèi)休氏試液滴定至終點(diǎn)。

2結(jié)果與討論

2.1加熱爐樣品轉(zhuǎn)換器加熱溫度及終止時(shí)間的選擇

加熱爐樣品轉(zhuǎn)換器的溫度直接影響樣品中水分的蒸發(fā)；終止條件也是影響測(cè)定結(jié)果的關(guān)鍵因素，加熱時(shí)間太短，樣品中的水分未完全蒸發(fā)，導(dǎo)致測(cè)定結(jié)果偏低；加熱時(shí)間太長(zhǎng)，則延長(zhǎng)了測(cè)定時(shí)間，環(huán)境因素的影響變大，因此需要選擇合適的終止時(shí)間和加熱溫度[3]。試驗(yàn)分別選擇自動(dòng)終止、加熱10 min和加熱15 min作為終止條件，在不同的終止條件下分別選擇了140、150、160℃作為加熱溫度，每種條件下連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果見表1、表2、表3。結(jié)果表明，當(dāng)選擇自動(dòng)終止條件時(shí)，三個(gè)加熱溫度的樣品結(jié)果的RSD相對(duì)較大；當(dāng)選擇10 min和15 min作為終止條件時(shí)，加熱溫度為150℃和160℃時(shí)，樣品結(jié)果的差異較小。因此選擇加熱溫度150℃，終止條件為10 min比較合適。

表1自動(dòng)終止條件下不同加熱溫度的樣品水分測(cè)定結(jié)果

表2加熱10 min條件下不同加熱溫度的樣品水分測(cè)定結(jié)果

表3加熱15 min條件下不同加熱溫度的樣品水分測(cè)定結(jié)果

2.2稱樣量的選擇

在150℃加熱10 min的測(cè)定條件下，樣品稱樣量也會(huì)對(duì)測(cè)定結(jié)果有影響[4]。分別稱取0.03g、0.04g、0.05g、0.06g、0.07g、0.08g、0.09 g、0.10g、0.11g、0.12g的樣品質(zhì)量，考察樣品稱樣量對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響，結(jié)果見圖1。從圖中可以看出，儀器測(cè)得樣品水分含量隨著加入樣品質(zhì)量的增大逐漸趨于穩(wěn)定，當(dāng)單次加入的樣品質(zhì)量較小時(shí)，測(cè)得結(jié)果偏高[5]。稱量樣品質(zhì)量在50～120 mg結(jié)果無(wú)明顯差異。

圖1不同樣品質(zhì)量的測(cè)定結(jié)果

2.3費(fèi)休氏試劑滴定度對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響

在150℃加熱10 min的測(cè)定條件下，不同滴定度的費(fèi)休氏試劑對(duì)測(cè)定結(jié)果有影響。分別采用滴定度為1 mg/mL、2 mg/mL、5 mg/mL的費(fèi)休氏試劑，考察不同滴定度的費(fèi)休氏試劑對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響，結(jié)果見表4。結(jié)果表明，不同滴定度的費(fèi)休氏試液對(duì)測(cè)定結(jié)果無(wú)明顯差異。

表4不同滴定度的測(cè)定結(jié)果%

2.4重復(fù)性試驗(yàn)

在150℃加熱10 min的測(cè)定條件下，采用滴定度為1 mg/mL的費(fèi)休氏試劑，用卡氏干燥爐自動(dòng)進(jìn)樣法測(cè)定樣品中水分含量，樣品測(cè)定6次，計(jì)算6次結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD%）數(shù)據(jù)見表5。結(jié)果表明測(cè)定結(jié)果具有良好的重復(fù)性。

表5重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.5回收率試驗(yàn)

在樣品中加入精密稱取的標(biāo)準(zhǔn)水加標(biāo)水平分別為0.3 mg、0.4 mg、0.5 mg，在150℃加熱10 min的測(cè)定條件下，采用滴定度為1 mg/mL的費(fèi)休氏試劑，每個(gè)加標(biāo)水平重復(fù)測(cè)定3次，經(jīng)測(cè)定，加標(biāo)回收率在91.8%～100.1%，結(jié)果見表6。

3結(jié)論

表6準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

本文考察了影響水分測(cè)定儀-卡氏干燥爐聯(lián)用法測(cè)定注射用重組人干擾素α2a中水分含量的因素，建立了該制品水分的檢測(cè)方法。研究結(jié)果表明，加熱溫度及加熱時(shí)間對(duì)該制品水分的測(cè)定具有一定影響。實(shí)驗(yàn)也考察了樣品稱量質(zhì)量及費(fèi)休氏試劑滴定度對(duì)測(cè)定結(jié)果的影響。當(dāng)樣品稱量質(zhì)量較小時(shí)，天平稱量誤差及儀器漂移引起的誤差將對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生顯著影響，實(shí)驗(yàn)結(jié)果明顯偏高；費(fèi)休氏試劑滴定度對(duì)測(cè)定結(jié)果無(wú)顯著影響。實(shí)驗(yàn)使用固體標(biāo)準(zhǔn)水對(duì)實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行確證，實(shí)驗(yàn)結(jié)果相對(duì)穩(wěn)定。因此，采用水分測(cè)定儀-卡氏干燥爐聯(lián)用測(cè)定注射用重組人干擾素α2a中水分含量，選擇干燥爐150℃加熱10 min，樣品稱量質(zhì)量50～120 mg作為檢測(cè)條件時(shí)，其操作過(guò)程方便簡(jiǎn)潔，且方法準(zhǔn)確可靠，符合實(shí)際樣品的檢測(cè)需求。